AF555 NHS 活化酯 [ Alexa Fluor 555 NHS ester ]

AF555，即Alexa Flour 555，是Alexa Fluor家族中的一种橘黄色-橙红色荧光染料，是Sulfo-Cy3的类似物，常用于代替Cy3、TAMRA染料使用。AF555染料的激发谱和发射谱具有较好的对称性，并且都有非常典型的肩峰，激发谱的肩峰巧合处于532nm激光束附近，在共聚焦实验中常常被用于激发AF555染料。AF555染料的激发峰和发射峰谱带恰好处于黄色光与红色光过度区域，因此，激发光往往呈黄色或者黄绿色，发射出来的荧光为黄红色（橙红色），这种荧光色彩和AF488的绿色荧光一样，都是人肉眼非常敏感的彩色光，在荧光显微镜下很容易辨认出来。

AF555染料的极性很大，水溶性极强，荧光亮度和荧光稳定性也极好，是蛋白/抗体标记的良好染料。从化学结构上看，AF555的母核是花青素Cy3，但是母核上带有多达4个磺酸根基团，相对于二磺酸的sulfo-Cy3，足足多了一倍。 AF555染料的四磺酸结构让其具有极度亲水性，染料标记到蛋白表面后，不会改变蛋白表面极性，降低了蛋白疏水化聚集沉淀的风险；磺酸根带有多电荷，这让蛋白表面标记的多个AF555分子间互相电荷排斥，极大降低了染料局部靠近而荧光淬灭的概率，因此AF555标记后的蛋白往往发出更强的荧光，亮度比sulfo-Cy3标记的样品要强20%以上。

NHS活化酯(N-羟基琥珀酰亚胺酯，N-hydroxysuccinimide ester，succinimidyl ester, SE)是生物标记反应中最常用的活化基团。NHS活化AF555分子中的羧基，让它可以和目标生物分子上的胺基（主要伯胺）反应生成稳定的酰胺键，从而把AF555荧光分子标记到生物大分子上。所得 Alexa Fluor 偶联物将显示出比其他光谱相似荧光基团的偶联物更亮的荧光和更高的光稳定性。