产品描述
Cy3 (Cyanine 3) 是一种发橘黄色荧光的花青素荧光染料。它的荧光很亮,对pH不敏感,并且处在肉眼较敏感的可见光区,在绝大多数荧光仪器上都可使用。Cy3可以用来标记蛋白,抗体,多肽,核酸分子等。
NHS活化酯(N-羟基琥珀酰亚胺酯,N-hydroxysuccinimide ester,succinimidyl ester)是生物标记反应中最常用的活化基团。NHS活化Cy3分子中的羧基,让它可以和目标生物分子上的胺基(主要伯胺)反应生成稳定的酰胺键,从而把Cy3分子标记到生物大分子上。由于游离胺基是蛋白,抗体,多肽表面的常见官能团(来自于赖胺酸侧链),Cy3-NHS可以和它们直接反应。核酸分子中天然不带游离胺基,只有胺基修饰过的RNA或者DNA才可以和Cy3-NHS反应。
Cy3-NHS活化酯的水溶性较低,所以在水相的标记反应体系内需要使用有机共溶剂,常用有机溶剂包括DMF,DMSO和乙腈等。如需标记的分子对有机溶剂敏感,可选择磺化花青素(sulfonated cyanine),即sulfo-Cy3-NHS活化酯( D10016 )。两者的光谱性质几乎一致,因此大部分应用可相互替换。两者的主要区别在于:磺化染料是水溶性的,在水相的标记反应体系内不需要使用有机共溶剂,并且降低染料在水中聚集的可能性,增强标记效率。
Cy3染料Ex/Em是554/566nm。和它具有相似荧光特性的染料包括TAMRA,Alexa Fluor 555,DyLight 550,BODIPY® TMR-X等。
注意事项
- NHS ester基团对湿度比较敏感,务必干燥保存产品。使用前产品需放到室温回温至少20分钟。
- 使用不含氨基的缓冲体系,比如磷酸钠缓冲液(PBS),Hepes缓冲液,碳酸氢钠缓冲液,或硼酸缓冲液等。不要使用任何含伯胺或仲胺的缓冲液,比如Tris,甘氨酸等。高浓度咪唑(imidazole)也会影响反应。
- 标记反应不要放在强光下,因为大部分荧光化合物在强光下长时间照射会缓慢光漂泊(photobleaching)。