AF647

AF647（Alexa Fluor 647）是Alexa Fluor染料家族中一种发远红（far-red）荧光的染料，是最常用的一种AF染料之一，在重要实验中，常常被用于替代Cy5染料。AF647的极性大，水溶性极好，荧光稳定性能也不错，能耐受较长时间照射，特别适应于标记蛋白质，是二抗标记的常规荧光染料。尽管AF647的量子产率不算高，但是其消光系数非常高（即表现为颜色深，分子吸收光子能力强），所以AF647的荧光亮度很高，另外，由于远红光区样品背景弱，而CCD相机对该区光子检测都较灵敏，所以各种因素加成之下，让AF647成为最灵敏的荧光染料之一，常常可检测出丰度非常低的样品。AF647的ex/em和Cy5非常接近，因此在常规荧光显微镜时可使用Cy5滤片组；在共聚焦显微成像时，633nm激光束可以良好的激发该染料，594nm激光也可以通过该染料的肩峰激发，很好的适配了生物实验室常规平台激光器，包括常规共聚焦显微镜、流式细胞仪和荧光扫描仪等。

AF647参数表

	激发峰(Ex)	发射峰(Em)	消光系数(εmax)	量子产率(Φ)	水溶性(水)	脂溶性(氯仿)
AF647	648nm	671nm	270000	0.33

在生物学应用中，AF647的运用场景与Cy5比较接近，其实从化学结构上看，AF647就是一种高度磺酸化的Cy5染料，各种荧光属性，包括ex/em，消光系数等都与sulfo-Cy5非常接近。尽管如此，AF647是一种比sulfo-Cy5更高级，更先进的染料，主要体现在它的高度磺酸化。AF647带有4个磺酸根离子，比sulfo-Cy5多了1倍，磺酸根离子极大的增强的AF647的水溶性和极性，另外还让其带上了4个负电荷，负电荷的加持让AF647染料分子更不容易聚集，从而降低了染料分子荧光淬灭的几率，这一特性让其在蛋白标记中特别有益，比如AF647标记的蛋白不易聚集变性，蛋白表面可以容忍标记多个AF647染料分子从而达到信号倍增等。磺酸化给AF647带来的另一个优势是更高的荧光亮度和染料稳定性，据称AF647标记的样品要比两个磺酸的sulfo-Cy5亮25%左右，并且能耐受更久的激发光源照射，这些优势可能归功于磺酸根对共轭亚甲基桥链的吸电子作用。

 

AF647相关试剂

我们提供一系列AF647相关试剂。

AF647染料标记用试剂