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细胞示踪显影

细胞示踪显影

追踪活细胞的迁移，形态变化及增殖具有重要的生物学意义。在研究细胞迁移运动和组织定位时，一般需要实验前将待研究的细胞进行荧光染料染色，以方便后面对该细胞的追踪和显影。这些染色染料需要满足几个特点，首先必须要对活细胞无毒性；其次染料染色细胞后不会跳染，即在复杂环境中染料不会从染好的细胞上跳转到另一个细胞上；最后，染料染色细胞后不会对细胞的其它表征实验产生干扰，比如，不会影响抗体对细胞受体的结合，不会影响细胞的代谢通路等。

细胞示踪荧光探针染料是在复杂环境中追踪细胞的重要工具，广泛应用于细胞迁移、创伤愈合及干细胞分化研究。根据需要可以选择用于短时程细胞追踪或长时程细胞追踪的探针染料，同时还有多种荧光染料颜色可供选择，以便匹配仪器的激光器和滤光片。这些探针稳定无毒、可在细胞内稳定保留，并发出明亮荧光，可以稳定追踪细胞几代或者数天之久，如需能追踪5天甚至更久方法，可以尝试荧光融合蛋白示踪法。

细胞示踪染料选择指南

透膜反应性示踪 (Membrane-Permeant Reactive Tracers)

  该类示踪染料一般呈脂溶性，可自由透过细胞膜，但是到达细胞质后，染料会与细胞质中蛋白偶联反应，或者染料本身会在胞内酶的作用下转变为极性染料，从而再也无法透出细胞膜，实现细胞的示踪标记。

亲脂性细胞膜示踪 (Tracers for Membrane Labeling)

  一般为带有长烷基碳链的荧光染料，和细胞膜具有很好的相容性，特异性嵌入到细胞膜上，作为质膜的一部分，不会产生毒性，也不会在细胞间跳转，但在细胞分裂时会减半遗传给下一代。因为示踪染料在细胞膜上的良好稳定性，可以准确定位细胞。

极性示踪染料 (Polar Celltracers)

  该示踪染料为强极性的染料分子或者染料标记物，一般不能透过细胞膜，需要注射到胞内来实现示踪运用。比如AF染料的衍生物，染料标记的dextran，和一些染料标记的蛋白等。

量子点长时程示踪 (Quantum Dot Celltracker)

  一般为表面修饰的量子点。量子点稳定性好，不会被细胞降解，也不会淬灭，荧光亮度强，适合长时间追踪细胞。为了方便的标记细胞，一般采用表面用多聚精氨酸（polyarginine）修饰的量子点，这类量子点可以被细胞主动摄取到胞内，从而长期呆在细胞内示踪细胞。

荧光蛋白转导示踪 (Fluorescent Protein Celltracers)

  利用荧光融合蛋白来示踪细胞，这是目前最长效的示踪细胞的方法，可以追踪细胞十代以上。