产品描述
AF555,即Alexa Flour 555,是Alexa Fluor家族中的一种橘黄色-橙红色荧光染料,是Sulfo-Cy3的类似物,常用于代替Cy3、TAMRA染料使用。AF555染料的激发谱和发射谱具有较好的对称性,并且都有非常典型的肩峰,激发谱的肩峰巧合处于532nm激光束附近,在共聚焦实验中常常被用于激发AF555染料。AF555染料的激发峰和发射峰谱带恰好处于黄色光与红色光过度区域,因此,激发光往往呈黄色或者黄绿色,发射出来的荧光为黄红色(橙红色),这种荧光色彩和AF488的绿色荧光一样,都是人肉眼非常敏感的彩色光,在荧光显微镜下很容易辨认出来。
AF555染料的极性很大,水溶性极强,荧光亮度和荧光稳定性也极好,是蛋白/抗体标记的良好染料。从化学结构上看,AF555的母核是花青素Cy3,但是母核上带有多达4个磺酸根基团,相对于二磺酸的sulfo-Cy3,足足多了一倍。 AF555染料的四磺酸结构让其具有极度亲水性,染料标记到蛋白表面后,不会改变蛋白表面极性,降低了蛋白疏水化聚集沉淀的风险;磺酸根带有多电荷,这让蛋白表面标记的多个AF555分子间互相电荷排斥,极大降低了染料局部靠近而荧光淬灭的概率,因此AF555标记后的蛋白往往发出更强的荧光,亮度比sulfo-Cy3标记的样品要强20%以上。
马来酰亚胺(maleimide)是生物标记反应中常用的基团,它可以和巯基(-SH)通过亲和加成反应生成稳定的巯醚(thioester)结构从而实现标记。尽管胺基(比如赖氨酸精氨酸侧链)也有亲和性,但在中性或微酸性缓冲液中,马来酰亚胺选择性标记巯基(反应速度比胺基快>1000倍)。标记反应反应迅速,选择性高,产率好,另外,巯基是一种在生物分子中广泛存在的官能团,比如蛋白中的半胱氨酸(cysteine)和双硫键等,因此马来酰亚胺/巯基(maleimide/thiol)标记已成为仅次于NHS/胺基标记的最常用生物连接反应(bioconjugation)。