Halo tag TMR 配体 [ Halo tag TMR Ligand ]

Halo tag TMR配体是Halo蛋白的化学配体中最著名的配体。它由CA单元和TMR荧光染料组成，其中CA单元是chloroalkane的缩写，即氯代己烷，是Halo蛋白的反应底物，氯代烷末端一般带2个小PEG单元，可提高底物延展性和水溶性；TMR染料是报告基团，底物偶联上Halo蛋白后，为蛋白提供荧光。多篇文献表明，TMR不但为Halo蛋白带来荧光特性，让其具备类似eGFP蛋白的荧光报告功能，TMR的化学结构还与Halo蛋白的反应口袋具有很好的匹配性，可显著提高CA单元与Halo蛋白的亲和力（Kd值），从而提高偶联效率和反应速率，因此Halo tag TMR是一种反应非常快的蛋白自标记配体，往往几分钟内即可标记完全，比其它Halo tag配体要快。

TMR，又常称作TAMRA，四甲基罗丹明（Tetramethylrhodamine），是一种经典的罗丹明染料，也是生物偶联中常用的荧光染料，激发后呈黄红色荧光（ex/em 550/576 nm）。Halo tag TMR配体中选用了6位异构纯TMR，这是因为相比于5位异构TMR，6位异构TMR具有更强的蛋白口袋匹配性和更高的反应活性。另外，根据蛋白结晶解析的三维结构（PDB: 6u32），配体偶联后TMR染料分子与CA单元碳链呈垂直构象，恰好封住袋口，这种构象限制了染料分子化学键的自旋，从而提高了TMR染料的量子产率，表现为配体偶联后，TMR染料荧光增强，也就是说Halo tag TMR配体和Halo蛋白偶联后，荧光会变得更亮。

应用亮点

• Halo tag TMR配体具有良好的透膜性和足够的水溶性，配制与使用都非常方便；
• Halo tag TMR配体反应活性高，在低浓度下即可高效自标记Halo蛋白，荧光亮度高，不用清洗，标记快速；
• Halo tag TMR与蛋白的共价键很稳定，支持细胞固定、变性跑胶等苛刻条件。

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