磺化Cy3.5-NHS 活化酯 [ Sulfo-Cyanine 3.5 NHS ester ]

磺化Cy3.5 (sulfo Cyanine 3.5; sulfo Cy3.5) 是一种发红色荧光的花青素类荧光染料。磺化Cy3.5是磺化修饰过的Cy3.5，水溶性好，它在显影时可以用561nm或者594nm的激光束激发然后用 Texas Red® 或相似的滤片观察，所以也是一种非常常用的标记染料。磺化Cy3.5-NHS可以用来标记蛋白，抗体，多肽,核酸分子等。由于强水溶性加带电荷，磺化花青素标记的生物分子更稳定，不易产生疏水性聚集。

NHS活化酯 （N-羟基琥珀酰亚胺酯，N-hydroxysuccinimide ester，succinimidyl ester）是生物标记反应中最常用的活化基团。它活化Cy3.5分子中的羧基，让它可以和目标生物分子上的胺基（伯胺或者仲胺）反应生成稳定的酰胺键，从而把磺化Cy3.5分子标记到生物大分子上。由于游离胺基是蛋白，抗体，多肽表面的常见官能团（来自于赖胺酸侧链），磺化Cy3.5-NHS可以和它们直接反应。核酸分子中天然不带游离胺基，只有胺基修饰过的RNA或者DNA才可以和磺化Cy3.5-NHS反应。

磺化Cy3.5-NHS活化酯的水溶性非常好，所以可以在水相的标记反应体系中直接使用，不需要有机溶剂助溶，特别适合标记蛋白等对有机溶剂敏感的生物分子。另外磺化Cy3.5水溶性极好，并且染料分子本身带电荷，标记到蛋白表面后不会引发疏水性蛋白聚集，提高荧光标记产物的稳定性。磺化Cy3.5-NHS也溶于甲醇，DMSO，DMF等有机溶剂，标记反应也可以在纯有机溶剂中进行。如需脂溶性Cy3.5染料，可选择普通花青素（cyanine），即Cy3.5-NHS活化酯( D10011 )。

磺化Cy3.5-NHS标记后的产物Ex/Em是591nm/604nm。和它具有相似荧光特性的染料包括Texas Red®，Alexa Fluor 594, BODIPY® TR, DyLight 594等。

注意事项

• NHS活化酯基团对湿度比较敏感，务必干燥保存产品。使用前产品需放到室温回温至少20分钟。
• 使用不含氨基的缓冲体系。比如磷酸钠缓冲液（PBS），Hepes缓冲液，碳酸氢钠缓冲液；或硼酸缓冲液等。不要使用任何含伯胺或仲胺的缓冲液，比如Tris，甘氨酸等，它们会和Cy3.5上的伯胺竞争。高浓度咪唑(imidazole)也会影响反应。
• 标记反应不要放在强光下，因为大部分荧光化合物在强光下长时间照射会缓慢光漂白(photobleaching)。

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